GENEL ÖZELLİKLER

• Süt ve süt ürünlerinde Melamin varlığının saptanabilmesi ve ölçülebilmesi için geliştirilmiş bir testtir.
• Zivak LC-MS/MS Melamin ölçüm kiti, süt ve süt ürünlerinde melamin varlığının  yüksek bir özgüllük ve analitik hassasiyetle ölçülebilmesi için üretilmiştir.
• Bu yöntemle yapılan analizlerin özgüllüğü % 100’dür.
• Bu yönteme gerçekleştirilen organik asit ölçümlerinin çok yüksek bir analitik hassasiyeti vardır (LOD, 0.35 ppb; LOQ, 1 ppb).
• Kısa analiz süresi ile sekiz saatte 100 örneği analiz atmek mümkündür.
•  Zivak LC-MS/MS Melamin analiz kiti, Tandem Gold kütle spektrometrisi ile uyumLudur.
• Kit içerisinde 200 örneği sonuçlandırmak için gerekli reaktif, sarf malzemeleri ve ekipman bulunur.
• Zivak - LC-MS/MS Melamin analiz kiti, süt ve süt ürünlerine katılmış olabilecek Melamin katkısının tarama ve miktar tayininde kullanılabilir.
• Zivak- Amino asit LC-MS/MS analiz kiti  TS ISO 9001:2000 ve TS ISO 13485:2003 kalite güvence sistemleri ile üretilmektedir.

AMAÇ

Süt de dahil olmak üzere, pek çok gıda malzemesi ve organik sıvılardaki protein miktarı ölçümü, proteinler içerisindeki azot miktarının sabit olmasına da dayanarak, örnek içerisindeki azot miktarının ölçülmesine dayanmaktadır. Melamin de, kütlesinin üçte ikisi azot olan bir moleküldür. Bu ve benzeri yüksek oranda azot içeren moleküllerin gıdalara eklenmesi sonucunda, bu moleküllerin içerdiği yüksek azot, protein içeriği analizlerinde bu gıdaların protein içeriğinin olduğundan yüksek çıkmasına neden olmaktadır. Yanıltıcı amaçlarla gıdalara katılan melamin ise, üriner sistem problemleri ve kanser gibi çeşitli sağlık sorunlarına neden olabilmektedir.

Bu nedenle süt ve süt ürünleri başta olmak üzere, gıda ürünlerinin Melamin içerip içermediğinin taranması ve tespit edildiği zaman miktar tayini yapılabilmesi gerekebilmektedir.

ÖRNEK VE REAKTİF HAZIRLAMA PROSEDÜRÜ

Örnek Hazırlanması:

1. 5 mL süt örneği 50 mL’lik santrifüj tüpüne alınır.
2. 10 mL R1 eklenir.
3. 0,5 mL R2 eklenir. Vorteksle 15 sn karıştırılır.
4. 4000 x g’ de 10 dk santrifüj edilir. Santrifüj esnasında SPE kartuşunun şartlandırma işlemleri yapılır.

İlave Standart Hazırlanması:  

1. 5 mL süt örneği 50 mL’lik santrifüj tüpüne alınır.
2. 50 µL standart çözeltisi eklenir. (son konsantrasyon 100 ppb)
3. 10 mL R1 eklenir.
4. 0,5 mL R2 eklenir. Vorteksle 15 sn karıştırılır.
5. 4000 x g’ de 10 dakika santrifüj edilir. Santrifüj esnasında SPE kartuşunun şartlandırma işlemleri yapılır.

SPE işlemi:

1. Kitle birlikte verilen SPE kartuşları SPE manifolduna yerleştirilir. Manifoldun altına atık toplama ünitesi monte edilir.
2. SPE kartuşuna 4 mL R3 eklenir. Saniyede 1-2 damla akış hızı ile kartuştan geçirilir.
3. SPE kartuşuna 4 mL R4 eklenir. Saniyede 1-2 damla akış hızı ile kartuştan geçirilir.
4. Santrifüj edilen numune hazırlama tüpünden üstte biriken yağ tabakasını almamaya özen göstererek pipet yardımıyla 7 mL alınır. SPE kartuşuna eklenir. Saniyede 1-2 damla akış hızı ile kartuştan geçirilir. Numunenin tamamı geçtikten sonra santrifü tüpünden 7 mL daha alınarak kartuşa eklenir. Saniyede 1-2 damla akış hızı ile kartuştan geçirilir.
5. Numune geçirildikten sonra SPE kartuşuna 4 mL R4 eklenir. Saniyede 1-2 damla akış hızı ile kartuştan geçirilir.
6. SPE kartuşuna 4 mL R3 eklenir. Saniyede 1-2 damla akış hızı ile kartuştan geçirilir. Bu aşamadan sonra SPE kartuşu yüksek hava akışı ile kurutulur.
7. Manifoldun altına örnek toplama tüpleri yerleştirilir. SPE kartuşuna 4 mL R5 eklenir. Saniyede 1-2 damla akış hızı ile kartuştan geçirilerek elüsyon yapılır.
8. Elüe edilen örnek, örnek hazırlama şişelerine alınarak LC-MS/MS sistemine 10 µL enjeksiyon yapılır.

Miktarlandırma:

Analiz numunesinden elde edilen kromatogramdaki ilgili piklerin alanları hesaplanır. (A_T)

İlave standart numunesinden elde edilen kromatogramdaki pik alanaları hesaplanır. (A_S)

Aşağıdaki formüle göre miktarlandırma işlemi yapılır. Miktarlandırma limitinin üzerindeki değerler rapor edilir.

Analit Konsantrasyonu (ppb) =" " C_S*A_T / A_S

C_S: İlave edilen standart konsantrasyonu.

ÖLÇÜM PARAMETRELERİ

HPLC Parametreleri:

Zaman	%A	%B	Akış hızı (mL/dk)
0:00	0	100	0,70
3,30	0	100	0,70

Enjeksiyon Hacmi : 10 µL

Otomatik Örnekleyici Yıkama Solventi : (10:90  h/h) Su:Metanol karışımı

MS Parametreleri:

Kolon	Zivak-MLN kolon
Enjeksiyon hacmi	10 µL
İyonizasyon	ESI pozitif
API Nebulizing	55 psi
Tarama zamanı	0,300 saniye
SIM Genişliği	0,7 amu
Mass peak width	0,7 amu
Quad 1	Kalibre edildiği gibi
Quad 3	Kalibre edildiği gibi
Kuruma Gaz Isısı.	300 °C, 30psi
İğne	3500V
Kalkan	600V
Kapiller	40V
Dedektör	1800 V

	RT	MH+ (m/z)	MS/MS	Capillary (eV)	CE (eV)
Melamin	2,1	127	85	40V	15V

6 Yollu Vana Programı:

Süre	Konum
0 — 1,8  dk	Load
1,8 - 3,5 dk	Inject